凝膠過(guò)濾柱利用凝膠顆粒內(nèi)部網(wǎng)孔的大小差異來(lái)分離不同分子大小的化合物。比凝膠網(wǎng)孔小的化合物可自由進(jìn)入凝膠顆粒內(nèi)部，而比網(wǎng)孔大的化合物則不能進(jìn)入凝膠顆粒內(nèi)部，被排阻在外部間隙。隨移動(dòng)相流動(dòng)，大分子化合物因僅能通過(guò)凝膠外部間隙，阻力小、流速快，先被洗脫；小分子化合物因進(jìn)入凝膠內(nèi)部，阻力大、滯留在內(nèi)部時(shí)間長(zhǎng)、流速慢，后被洗脫。這種因分子大小導(dǎo)致的移動(dòng)速率差異，使得不同分子大小的化合物得以分離。
 

　　凝膠過(guò)濾柱(尺寸排阻層析柱)作為一種基于分子大小差異進(jìn)行分離的色譜技術(shù)，具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。
 

　　操作條件溫和，保護(hù)樣品活性
 

　　凝膠過(guò)濾柱通常在常溫或低溫下進(jìn)行，無(wú)需有機(jī)溶劑或極*pH條件，避免了對(duì)蛋白質(zhì)、核酸等生物大分子的變性或失活，尤其適用于熱敏感或易降解樣品的分離。
 

　　分離范圍廣，適用性多樣
 

　　可分離分子量跨度大的物質(zhì)(如從幾百道爾頓的小分子到數(shù)百萬(wàn)道爾頓的蛋白質(zhì)復(fù)合物)，且通過(guò)選擇不同孔徑的凝膠填料(如Sephadex、Superdex系列)，可靈活調(diào)整分離范圍，滿足多樣化需求。
 

　　分辨率高，分離效果顯*
 

　　對(duì)分子量差異明顯的物質(zhì)(如單體與二聚體、多聚體)分離效果優(yōu)異，常用于抗體藥物質(zhì)量控制中檢測(cè)聚合形態(tài)比例，或蛋白質(zhì)純化中去除雜蛋白。
 

　　功能多樣，一柱多用
 

　　除分離外，還可用于脫鹽、緩沖液置換、分子量測(cè)定(通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)蛋白校準(zhǔn)曲線估算未知蛋白分子量)等，簡(jiǎn)化了實(shí)驗(yàn)流程，提高了效率。
 

　　重復(fù)使用率高，成本效益佳
 

　　凝膠填料可多次再生使用(如用NaOH或乙醇清洗后保存于20%乙醇中)，降低了長(zhǎng)期使用成本，尤其適合大規(guī)模分離或頻繁操作的場(chǎng)景。
 

　　6 樣品回收率高，損失小
 

　　分離過(guò)程中樣品吸附損失較少，回收率通常較高，尤其適用于珍貴或樣品的處理。